弓形虫IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
【产品名称】
中文名称：弓形虫IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
【包装规格】
48人份／盒、96人份／盒。
【预期用途】
定性检测人血清或血浆样本中的弓形虫IgM抗体。
用于弓形虫感染的辅助诊断。检测不得用于无症状人群的产前筛查；不得将本试剂的检测结果单独作为终止妊娠的依据。
弓形虫病（Toxoplasmosis）又称弓形体病，是由刚地弓形虫所引起的人畜共患病。本病流行于世界各地，弓形虫是一种原虫，几乎所有的哺乳动物都有弓形虫寄生，是人类的传染源，其中，猫和猫科动物在传染此病时最为重要，因为常有大量的传染性卵囊随猫的粪便排出，污染外界环境，如人手、食具、食物或水被卵囊污染，即可经口感染；猫狗的唾液中可有弓形虫，与猫狗玩耍时，手、脸被舔也可被感染，其次是猪、牛、羊，它们的肌肉中也可有包囊，未煮食用也可经口感染，不同国家和地区感染率差异性很大，平均在25～50%左右。国外报道人群自然感染率为50～80%[1]，国内为0.1～47.3%，平均为5.17%[2,3]。
文献报道[4~6]，由于肿瘤放疗、化疗的开展，致使患者免疫功能低下，而伴发弓形虫感染，甚至造成死亡。国外某些国家已将弓形虫血清学检测作为肿瘤病人常规检查[7]。孕妇感染弓形虫后，可通过胎盘垂直传播给胎儿，损害胚胎发育，引起胎儿严重的神经系统发育畸形和智力障碍，降低人口素质，甚至引起死亡。近期国内研究表明，我国孕妇弓形虫感染较普遍，对下一代的健康带来严重威胁[8~9]。
一般情况下，弓形虫感染后首先出现抗弓形虫IgM抗体上升，可在感染后6天左右被测知，然后逐渐上升并维持数周至数月，最后逐渐下降直至消失[10]，故测定弓形虫IgM抗体适用于早期诊断，而弓形虫IgG抗体的出现晚于IgM，感染后2～3个月才达峰值，维持时间也较长，因此消失也较晚。IgG抗体阳性说明曾经感染过弓形虫，一般多为慢性感染，但也可为急性感染。在第一次检测IgG抗体后2～3周再用同样的方法进行检测，如抗体的效价有4倍以上的增长，则具有诊断价值。
间接ELISA或IFA检测IgM抗体时，类风湿因子（RF）和抗核抗体（ANA）的存在可引起假阳性反应，而高滴度的IgG竞争作用又可导致假阴性。ELISA捕获法检测IgM在灵敏度与特异性方面克服上述缺陷而成为检测IgM抗体的首选方法。
【检验原理】
酶联免疫捕获法原理：用抗人IgM-μ链单克隆抗体包被微孔板，加待检者血清或血浆到板孔中，样品中存在的IgM抗体特异性地与微孔板表面的抗人IgM-μ链抗体形成抗体－二抗复合物，加入酶标记弓形虫抗体及弓形虫抗原，形成（抗体－二抗－抗原－抗弓形虫酶标记物）免疫复合物，加入底物后在酶作用下产生颜色反应，通过酶标仪测定显色反应的强弱即可定性检测待测样品中的弓形虫IgM抗体。
【主要组成成分】
1. 本试剂盒中包含的组分：
序号 组分名称 主要成分 使用方法 装量
    96人份/盒 48人份/盒
1 预包被抗人IgM-μ链抗体的微孔板 微孔板中预包被小鼠抗人IgM-μ链单克隆抗体。 直接使用，可拆成单孔使用 96孔 48孔
2 弓形虫抗体酶标记物 辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗弓形虫单抗；硼酸盐缓冲液，含弓形虫抗原、防腐剂、蛋白稳定剂。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
3 弓形虫IgM抗体阳性对照 弓形虫IgM抗体阳性人血清或血浆；硼酸盐缓冲液，含0.02%硫柳汞、蛋白稳定剂。 直接使用 1.0mL×1支 1.0mL×1支
4 弓形虫IgM抗体阴性对照 弓形虫IgM抗体阴性人血清或血浆；硼酸盐缓冲液，含0.02%硫柳汞、蛋白稳定剂。 直接使用 1.0mL×1支 1.0mL×1支
5 弓形虫IgM抗体临界对照 弓形虫IgM抗体阳性人血清或血浆；硼酸盐缓冲液，含0.02%硫柳汞、蛋白稳定剂。 直接使用 1.8mL×1支 1.8mL×1支
6 显色液A 柠檬酸、过氧化氢。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
7 显色液B 柠檬酸、四甲基联苯胺（TMB）。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
8 浓缩洗涤液
（10倍） 磷酸盐缓冲液，含0.5%吐温-20，10倍浓缩。 用蒸馏水或去离子水10倍稀释后使用 50mL×1瓶 50mL×1瓶
9 样品稀释液（IgM） 硼酸盐缓冲液，含甘油。 直接使用 50mL×2瓶 50mL×1瓶
10 终止液 0.5 mol/L 硫酸溶液。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
11 密封袋   1个 1个
12 封板膜   1片 4片
13 记录纸   1份 1份
注：酶标记物、临界对照、阳性对照、阴性对照，必须使用试剂盒配备的，不能使用其它批号产品。样品稀释液（IgM）可用于本公司IgM抗体检测系列的ELISA试剂盒。显色液A、显色液B、终止液、浓缩洗涤液为通用试剂，可以用于本公司所有ELISA试剂盒。
2. 需要但未提供的材料：
蒸馏水或去离子水
微孔板清洗器
10μL～100μL、1mL移液器与一次性吸嘴
37℃恒温设备
微孔振荡器
酶标仪
60分钟或更长时程的计时器
【储存条件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，有效期为12个月。
拆封后未用完的微孔板应放入密封袋内2～8℃保存。液体组分应拧紧瓶盖2～8℃保存。各组分拆封后应在一个月内用完。
生产日期及失效日期见标签。
【适用仪器】
具有450nm和630nm波长的酶标仪
【样本要求】
应按照临床采血技术规范操作采集血清或血浆样品。室温保存样品不要超过8小时；若实验在8小时以后进行，需将样品保存在2℃～8℃；如保存超过1周则保存在-20℃以下，并避免反复冻融。本试验可用于含乙二胺四乙酸（EDTA）、柠檬酸钠、肝素钠、草酸钠、双草酸盐抗凝剂样本的检测，但含其它种类抗凝剂的样本能否用于本试验尚无实验数据。尽管胆红素、血红蛋白、甘油三酯对本试剂盒检测结果无显著干扰，仍应避免使用黄疸、溶血或高血脂样品。明显被污染的样品不能用于检测。
【检验方法】
1. 试验过程注意事项
1.1 试剂盒各组分从冷藏环境中取出时，应在室温平衡至无潮气方可使用。拆封后未用完的包被板应放入密封袋内保存。
1.2 在储存及孵育过程中，应避免强光直接照射。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染。
1.3 为避免试剂或样品的微生物污染及交叉污染，应使用一次性吸嘴，不要重复使用。
1.4 在取用对照品和酶标记物之前应轻轻摇动使其充分混匀，加样前，使用微孔振荡器充分混匀稀释过的样品。
1.5 严格遵守规定的孵育时间和温度。如果第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔太长，将会导致不同的“预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。
1.6 洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液，避免产生泡沫。如果使用自动洗板机，应注意正确操作。
2. 试验准备
2.1 试剂盒反应试剂准备
2.1.1 微孔条
将检测所需数量的微孔条固定于板架上，剩余的微孔条放入密封袋中保存。
2.1.2 洗涤液
在干净的量筒内稀释浓缩洗涤液。50mL浓缩洗涤液加入蒸馏水或去离子水至500mL，混匀。
2.1.3 其它液体组分
直接使用，使用前应轻轻摇动使其充分混匀。
2.2 样品准备
样品1:100稀释：取10μL待检样品，加入至含有1mL样品稀释液（IgM）的小试管内，充分混匀。
3. 检测过程
3.1 每次实验每板须设空白孔、阳性对照、阴性对照各1孔，临界对照3孔。空白孔不加样品和酶标记物，只加洗液、显色液A、显色液B和终止液；阳性对照、阴性对照、临界对照直接使用，100μL/孔。其余每孔加入稀释后样品100μL。置37℃孵育60分钟。
3.2 甩净孔中液体，将洗液注满每孔（约300μL/孔）后，停留1分钟后甩净拍干，反复3次。除空白孔外每孔加酶标记物50μL，置37℃孵育60分钟。
3.3 甩净孔中液体，同上洗板3次，拍干后各孔加显色液A、显色液B各50μL，置37℃避光10～15分钟，每孔加入终止液50μL，轻微震荡微孔板以混合均匀。
3.4 以空白孔调零，用酶标仪读取450nm处的A值。或以双波长（A450nm－A630nm）计算A值。
4. 质量控制
阳性对照A值≥0.30，阴性对照A值≤0.15，临界对照A值平均值≥0.15，证明实验成立；否则试验结果无效，需重新试验。
【阳性判断值】
样品A值＜临界对照值均值为阴性，样品A值≥临界对照值均值为阳性。
【检验结果的解释】
1. 结果为阳性提示弓形虫急性或近期感染，对阳性结果建议1～2周后再次采样检测，动态观察抗体水平的变化。
2. 检测结果仅供临床参考，临床医生应结合病史、症状及其它检测结果做出诊断。
【检验方法的局限性】
1. 样品或试剂被微生物污染以及试剂的交叉污染可能导致错误结果。
2. 实验结果表明本品与交叉反应项目中所列干扰因子血清无交叉反应，但与其它干扰因子的交叉反应尚无实验数据。
【产品性能指标】
1. 灵敏度、特异性
通过1122例临床研究，本品与通过CE认证的同类进口试剂比较，灵敏度为96.4%，特异度为99.7%。
2. 重复性
用精密性参考品测定，CV（%）不高于15%（n＝10）。
3. 交叉反应
与类风湿因子及以下病原体的IgM抗体阳性血清无交叉反应：血吸虫、风疹病毒、麻疹病毒、单纯疱疹Ⅰ型病毒、单纯疱疹Ⅱ型病毒、巨细胞病毒。
4. 干扰试验
4.1 与样品接触的抗凝剂（EDTA、柠檬酸钠、肝素钠、草酸钠、双草酸盐）对本品检测结果无显著干扰。
4.2 内源性物质胆红素、血红蛋白、甘油三酯对本品检测结果无显著干扰。
4.3 纤维蛋白原对本品检测结果无显著干扰，因此本品可检测人血清或血浆样品。
【注意事项】
1. 本品仅用于体外诊断，一次性使用。
2. 用于制备本试剂盒阴性对照、阳性对照、临界对照的血清或血浆已经乙肝表面抗原（HBsAg）、丙型肝炎病毒（HCV）抗体、梅毒螺旋体抗体和人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体检测为阴性，试剂盒内其它各种组分均无生物传染性。由于不能保证检测各组分所有的传染性因素，因此本试剂盒应作为具有潜在的传染性材料对待，所有接触试剂盒的人员应按实验室规范要求进行操作。
3. 任何临床样品都应作为具有传染性样品对待。
4. 待检样品及其他潜在感染材料试验后应予以消毒。
5. 注意避免皮肤或黏膜直接接触试剂或样品。显色液中含TMB，终止液含硫酸。含TMB的试剂在试验中会诱发其它反应；含硫酸的试剂有腐蚀性。一旦接触到这些液体，应立即用水彻底清洗。
【标识的解释】
包装标签
的标识    
标识的含义 温度限制 体外诊断医疗器械 参考使用说明 不得二次使用
【参考文献】
[1] Mao SB. Chin Med. J. 1997, 100:445.
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【基本信息】
注册人/生产企业名称：珠海经济特区海泰生物制药有限公司
住所：珠海市唐家湾镇港湾大道创新四路18号     
联系方式：电话号码：0756-3890858
传真号码：0756-3890848
售后服务单位名称：珠海经济特区海泰生物制药有限公司
联系方式：电话号码：0756-3890858
生产地址：珠海市唐家湾镇港湾大道创新四路18号     
生产许可证编号：粤食药监械生产许20040941号
【医疗器械注册证书编号/产品技术要求编号】国械注准20163402554
【说明书核准及修改日期】2016年12月29日