风疹病毒IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）说明书
【产品名称】
通用名称：风疹病毒IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
【包装规格】 
48人份／盒、96人份／盒。
【预期用途】
产品定性检测人血清或血浆中的风疹病毒IgM抗体。 
风疹[1～3]属于疱疹类病毒中的披膜病毒科风疹病毒属，是引起风疹的病原体，为RNA病毒。风疹病毒经过呼吸道传播，潜伏期约2～3周，病毒增殖后进入血流引起病毒血症。风疹的临床表现类似麻疹，较麻疹感染症状轻，病程短，临床症状不易与麻疹区分，需要血清学方法鉴定。60年代中期，风疹疫苗的研制成功，使先天性风疹感染成为可预防的疾病。风疹病毒在人群中感染极为普遍，发达国家和地区由于对学龄前儿童、青少年和育龄妇女广泛接种疫苗，使得风疹的发病率很低[4，5]。而在我国不少地区仍有发生和流行[4、6～8]。妊娠期间，尤其是在妊娠早期感染了风疹病毒，不论发生显性或隐性感染均有可能导致胎儿患先天性风疹综合征(CRS)，即多脏器受到损害而导致先天性缺损。主要临床表现为：新生儿先天性心脏病、白内障、先天性耳聋、智力低下、发育迟缓、小头儿等。其损害的程度与孕妇感染的时间有关，妊娠期感染越早，畸形发生率越高，损害程度也越大。
风疹病毒感染后特异性IgM抗体出现早，上升快、持续时间短，出现皮疹后的两周后达到最高水平并持续1~2个月，因此，风疹IgM抗体检出可用于原发性风疹感染的诊断。
【检验原理】
酶联免疫间接法原理：用风疹病毒重组抗原包被微孔板，加待检者血清或血浆到板孔中，样品中的风疹病毒IgM抗体特异性地与微孔板表面的风疹病毒抗原结合，形成抗原抗体免疫复合物，洗板，除去多余物质后，加入抗人IgM抗体酶标记物，形成（抗原－抗体－二抗酶标记物）免疫复合物。洗板，除去多余的结合物，加入显色液，在酶作用下产生颜色反应，通过酶标仪测定显色反应的强弱即可定性检测待检样品中的风疹病毒IgM抗体。样品稀释液中含有羊抗人IgG抗体，可与样品中的人IgG抗体及类风湿因子结合，减少特异性IgG抗体及类风湿因子的干扰。
【主要组成成份】
1. 本试剂盒中包含的组份：
序号 组份名称 主要成分 使用方法 装量
    96人份／盒 48人份／盒
1 预包被风疹病毒抗原的微孔板 微孔板中预包被风疹病毒重组抗原。 可拆成单孔，直接使用 96孔 48孔
2 抗人IgM抗体酶标记物 辣根过氧化物酶（HRP）标记的小鼠抗人IgM单克隆抗体；硼酸盐缓冲液，含防腐剂、稳定剂等。 直接使用 6.5ml×1瓶 3.5ml×1瓶
3 风疹病毒IgM抗体阳性对照 风疹病毒IgM阳性人血浆或血清；硼酸缓冲液，含0.02%硫柳汞、稳定剂等。 直接使用 1.0ml×1支 1.0ml×1支
4 风疹病毒IgM抗体阴性对照 风疹病毒IgM阴性人血浆或血清；硼酸缓冲液，含0.02%硫柳汞、稳定剂等。 直接使用 1.0ml×1支 1.0ml×1支
5 风疹病毒IgM抗体临界对照 风疹病毒IgM阳性人血浆或血清；硼酸缓冲液，含0.02%硫柳汞、稳定剂等。 直接使用 1.8ml×1支 1.8ml×1支
6 显色液A 柠檬酸、过氧化氢等。 直接使用 6.5ml×1瓶 3.5ml×1瓶
7 显色液B 柠檬酸、四甲基联苯胺（TMB）等。 直接使用 6.5ml×1瓶 3.5ml×1瓶
8 浓缩洗涤液 磷酸盐缓冲液，含0.5%Tween-20，10倍浓缩。 用蒸馏水或去离子水10倍稀释后使用 50ml×1瓶 50ml×1瓶
9 样品稀释液（IgM） 硼酸盐缓冲液，含甘油、山羊抗人IgG等。 直接使用 50ml×2瓶 50ml×1瓶
10 终止液 0.5 mol/L H2SO4溶液。 直接使用 6.5ml×1瓶 3.5ml×1瓶
11 密封袋   1个 1个
12 封板膜   4片 4片
13 记录纸   1份 1份
注：酶标记物、临界对照、阳性对照、阴性对照，样品稀释液必须使用试剂盒配备的，不能使用其它批号产品。显色液A、显色液B、终止液、浓缩洗涤液为通用试剂，可以用于本公司所有ELISA试剂盒。
2. 需要但未提供的材料：
蒸馏水或去离子水
微孔板清洗器
10μl～100μl、1ml移液器与一次性吸嘴
37℃恒温设备
微孔振荡器
酶标仪
60分钟或更长时程的计时器
【储存条件及有效期】
2℃～8℃避光保存，有效期为12个月。
拆封后未用完的微孔板应放入密封袋内2℃～8℃保存，液体组分应拧紧瓶盖2℃～8℃保存。各组份拆封后应在一个月内用完。
生产日期及失效日期见标签。
【适用仪器】
具有450nm和630nm波长的酶标仪
【样本要求】
应按照临床采血技术规范操作采集血清或血浆样品。室温保存样品不要超过8小时；若实验在8小时以后进行，需将样品保存在2℃～8℃；如保存超过1周则保存在-20℃以下，并避免反复冻融。尽管胆红素、血红蛋白、甘油三酯对本试剂盒检测结果无显著干扰，仍应避免使用黄疸、溶血或高血脂样品。明显被污染的样品不能用于检测。
【检验方法】
1.  试验过程注意事项
1.1  试剂盒各组份从冷藏环境中取出时，应在室温（20℃～25℃）平衡至无潮气方可使用。拆封后未用完的包被板应放入密封袋内保存。
1.2  在储存及温育过程中，应避免强光直接照射。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染。
1.3  为避免试剂或样品的微生物污染及交叉污染，应使用一次性吸嘴，不要重复使用。
1.4  在取用对照品和酶标记物之前应轻轻摇动使其充分混匀，加样前，使用微孔振荡器充分混匀稀释过的样品。
1.5  严格遵守规定的温育时间和温度。如果第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔太长，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。
1.6  洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液，避免产生泡沫。如果使用自动洗板机，应注意正确操作。
2.  试验准备
2.1  试剂盒反应试剂准备
2.1.1  微孔条
将检测所需数量的微孔条固定于板架上，剩余的微孔条放入密封袋中保存。
2.1.2  洗涤液
在干净的量筒内稀释浓缩洗涤液。50ml浓缩洗涤液加入蒸馏水或去离子水至500ml，混匀。
2.1.3  其它液体组份
直接使用，使用前应轻轻摇动使其充分混匀。
2.2  样品准备
样品1:100稀释：取10l待检样品，加入至含有1ml样品稀释液（IgM）的小试管内，充分混匀。
3．  检测过程
3.1  每次实验每板须设空白孔（若以双波长检测不设空白孔）、阳性对照、阴性对照各1孔，临界对照3孔。空白孔不加样品和酶标记物，只加洗液、显色液A、显色液B和终止液；阳性对照、阴性对照、临界对照直接使用，100l/孔。其余每孔加入稀释后样品100l。置37℃±1℃温育30分钟。
3.2  甩净孔中液体，将洗液注满每孔（约300μl/孔）后，甩净拍干，反复3次。除空白孔外每孔加酶标记物50μl，置37℃±1℃温育30分钟。
3.3  甩净孔中液体，同上洗板3次，拍干后各孔加显色液A、显色液B各50μl，置37℃±1℃避光15分钟，每孔加入终止液50μl，轻微震荡微孔板以混合均匀。
3.4  单波长检测：以空白孔调零，用酶标仪读取450nm处的A值；
双波长检测：用酶标仪读取450nm和630nm处的A值，以A450nm－A630nm计算A值。
4.  质量控制
阴性对照A值≤0.15，0.20≤临界对照A值平均值≤0.80，临界对照A值平均值／阴性对照A值平均值≥2.0，阳性对照A值＞临界对照A值平均值，证明实验成立，否则试验结果无效，需重新试验。
【阳性判断值】
计算S/CO值，S/CO=样品A值／临界对照A值平均值。
反应性（R）：S/CO≥1.1
可疑（S）：0.9＜S/CO＜1.1
阴性（N）：S/CO≤0.9
【检验结果的解释】
1.  结果为反应性提示风疹病毒新近感染，对反应性或可疑（0.9＜S/CO＜1.1）结果建议患者在1周内再次采样检测，同时进行风疹IgG抗体检测，动态观察抗体水平的变化；或采用其它方法确认结果。
2.  感染初期，IgM未产生或滴度很低会导致阴性结果，疑似者应在7～14天内复查，复查时同时平行检测上次采集的标本以确认是否出现血清学阳转或滴度明显升高。
3.  免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，其血清抗体检测的参考价值有限。
4.  IgM抗体阳性不仅发生在原发感染，在继发感染亦可见IgM反应。
5.  假阳性和假阴性结果可能对临床造成不良影响，假阴性可能导致患先天性风疹综合征胎儿出生的风险，假阳性可能导致怀孕期妇女或新生儿接受不必要的抗病毒治疗等。
6.  检测结果仅供临床参考，临床医生应结合病史、症状及其它检测结果做出诊断。
【检验方法的局限性】
样品或试剂被微生物污染以及试剂的交叉污染可能导致错误结果。
【产品性能指标】
1.  灵敏度、特异性
本品检测1020例不同人群样本，灵敏度为96.7%，特异度为97.1%。
2.  精密性
批内不精密度CV（%）不高于15%（n＝10）。
3.  交叉反应
与抗核抗体阳性血清、RF阳性血清及以下病原体的IgM抗体阳性血清未发现交叉反应：麻疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、弓形虫、EB病毒、科萨奇病毒、腮腺炎病毒、人乳头状瘤病毒。与其它病原体的交叉反应尚无实验数据。
4.  干扰试验
与样品接触的常规抗凝剂（EDTA、柠檬酸钠、肝素钠）对本品检测结果无显著干扰。
一定浓度范围的内源性物质（胆红素0.1~0.4 mg/ml、血红蛋白5~50 mg/ml、甘油三酯2~8 mg/ml）对本品检测结果无显著干扰。
【注意事项】
1.  本品仅用于体外诊断，一次性使用。
2.  用于制备本品阴性对照、阳性对照、临界对照的血清或血浆已经HBsAg、HCV抗体、梅毒螺旋体抗体和HIV抗体检测为阴性，试剂盒内其它各种组份均无生物传染性。由于不能保证检测各组份所有的传染性因素，因此本品应作为具有潜在的传染性材料对待，所有接触试剂盒的人员应按实验室规范要求进行操作。
3.  任何临床样品都应作为具有传染性样品对待。
4.  待检样品及其他潜在感染材料试验后应予以消毒。
5.  注意避免皮肤或黏膜直接接触试剂或样品。显色液中含TMB，终止液含硫酸。含TMB的试剂在试验中会诱发其它反应；含硫酸的试剂有腐蚀性。一旦接触到这些液体，应立即用水彻底清洗。
【标识的解释】
包装标签
的标识    
标识的含义 温度限制 体外诊断医疗器械 参考使用说明 不得二次使用
【参考文献】
[1] 戴斌,常慧兰,韩秀娟,等. 我国正常人群风疹免疫状况的研究. 中华微生物学和免疫学杂志,1981,1(6): 411.
[2] Waxham MN. Immunochemical identification of rubella virus hemagglutinin. Virology, 1983, 126: 194.
[3] Ho M. Laboratory diagnosis of congenital and perinatal infection in Ed . New York: Plenum Medical Book Company, 1982,172.
[4] 耿贯一. 流行病学 (第2册). 第2版. 北京: 人民卫生出版社, 1996. 541-551.
[5] Pau lD, Park man K. Making vaccination policy: the experience with rubella. Clin 
Infec Dis, 1999, 28: 140-146.
[6] 徐福根,黄诚孝,姚怀芳,等.杭州市1-29岁人群的风疹抗体筛检和免疫研究.中华流行病杂志,1995,16: 94-96.
[7] 戴斌,方捍华,韩秀娟,等.妊娠早期妇女原发风疹感染率的研究.中华预防医学杂志,1992,269: 197-199.
[8] 金奇,主编.医学分子病毒学.北京:人民卫生出版社,2001.489-493.
【基本信息】
注册人/生产企业名称：珠海经济特区海泰生物制药有限公司
住所：珠海市唐家湾镇港湾大道创新四路18号     邮政编码：519085
联系方式：电话号码：0756-3890858         传真号码：0756-3890848
生产地址：珠海市唐家湾镇港湾大道创新四路18号     邮政编码：519085
生产许可证编号：粤食药监械生产许20040941号
【医疗器械注册证书编号/产品技术要求编号】国械注准20163402227
【说明书核准及修改日期】2016年11月01日